牡山羊草Aegilops juvenalis Puroindoline b基因的克隆

陈明洁，方倜，罗立廷，杨广笑，何光源

摘要：Puro indo line a(P ina)和puro indo line b(P inb)是控制小麦籽粒硬度的主效基因。根据已报道的小麦P inb基因的保守序列,设计合成了一对特异性引物,对六倍体牡山羊草A eg ilop s juvena lis(UUMM DD)的基因组DNA和胚乳cDNA进行P inb基因扩增、克隆和序列测定,发现了两个新型P inb等位基因P inb-a lle le-1和P inb-a lle le-2。该基因全长360 bp,编码119个氨基酸残基。它编码的蛋白和麦类作物Puro indo line B(P inB)的成熟蛋白有非常高的同源性,具有麦类作物P inB蛋白所特有的W PTKWW K的色氨酸结构域和10个半胱氨酸所形成的5个二硫键结构。与软粒小麦cv.C ap ito le的P inb-D 1a相比较,其核苷酸同源性为93.1%、93.3%,氨基酸同源性为90.8%、92.4%。P inb-a lle le-1和P inb-a lle le-2分别含有11和9个氨基酸变异位点。RT-PCR证实了P inb-a lle le-2基因在籽粒胚乳中的表达。Sou thern B lot分析结果表明,牡山羊草中含有两个拷贝的P inb基因,其中包含着与小麦差异较大的籽粒硬度控制基因。

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