表达大豆GMCHI 基因能够提高原核生物耐低温性

程立宝，李淑艳，景新明，何光源

摘要：低温是种子萌发过程中常见的自然灾害,在我国北方经常发生,这导致种子萌发率较差、降低植株活力等后果。利用cDNA-AFLP技术从低温(4℃)吸胀24h的抗低温吸胀大豆品种中黄22(低温吸胀24h对萌发率无影响的品种)中分离出一个基因片段,命名为GMCHI(GenBank登录号为EU699765),通过RACE方法得到全长为387bp的cDNA序列。在NCBI数据库中的查询表明,GMCHI基因和数据库记录的基因序列同源性较低,因此可以断定GMCHI是在大豆中被发现的新基因。半定量RT-PCR显示GMCHI受ABA和PEG诱导。该基因与PET30A连接后转入原核细胞,经过IPTG诱导,6%SDS-PAGE电泳条带说明,GMCHI在大肠杆菌中能够表达。把诱导表达和非诱导表达的菌落在?20℃下2h后,移至37℃培养20d,发现对照的菌落完全死亡,而诱导表达GMCHI的菌落只有部分死亡,并长出新菌落。RT-PCR检测表明新菌落携带GMCHI基因,证明GMCHI基因的表达提高了大肠杆菌的低温耐性。

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